1.簡介:
慢病毒(Lentivirus) 是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,慢病毒具有感染譜廣泛特點(diǎn),并且可以有效感染分裂和非分裂細(xì)胞。一經(jīng)感染宿主細(xì)胞,慢病毒即利用反轉(zhuǎn)錄酶將其RNA轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA,隨后永久的整合到宿主細(xì)胞的染色體中,實(shí)現(xiàn)長時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)。此外,慢病毒免疫原性低,不易造成免疫反應(yīng),所以現(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)除了被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因敲除/敲入、基因過表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究,還大量應(yīng)用于活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。
2. 實(shí)驗(yàn)流程:
客戶提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案→提供目的基因信息(質(zhì)粒測序圖譜、名稱、序列等)→所需要的病毒滴度及病毒液總量→是否需要純化,若需檢測外源基因的表達(dá),請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)抗體。
1、慢病毒包裝的應(yīng)用有哪些呢?
慢病毒(Lentivirus)載體是目前細(xì)胞及模式生物實(shí)驗(yàn)中非常有效的工具,在基因轉(zhuǎn)染方面有著許多獨(dú)特的優(yōu)勢,對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均能夠有效感染,可容納較大基因片段,同時(shí)能夠?qū)y帶的基因穩(wěn)定的整合到基因組中等優(yōu)勢,慢病毒包裝逐漸成為科研必備的實(shí)驗(yàn)技能之一,多用于感染各種腫瘤細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)或沉默目的蛋白的細(xì)胞株。
2、慢病毒感染后多久檢測細(xì)胞基因表達(dá)?
慢病毒感染后一般 72~96h 后檢測基因表達(dá),對(duì)于生長遲緩代謝慢的細(xì)胞,可以適當(dāng)推遲檢測時(shí)間,中途換液保持細(xì)胞的良好狀態(tài)。
3、通常在轉(zhuǎn)移載體中z大能夠插入多大的目的基因序列?
基于 HIV 基因骨架的原因,通常插入的目的基因序列要小于4 kb,否則會(huì)影響病毒滴度甚至基因表達(dá)。